荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。荧光显微镜利用一定波长的光激发标本发射荧光,通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。细胞中有些物质,如叶绿素等,受紫外线照射后可发荧光;另有一些物质本身虽不能发荧光,但如果用荧光染料或荧光抗体染色后,经紫外线照射亦可发荧光,荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。
荧光显微镜的使用方法
1、用窗帘遮蔽光线,关闭房间内的电灯,除去荧光显微镜的防尘罩,确保荧光显微镜灯室通风良好、无遮盖。装上汞灯灯箱,并转动灯箱卡圈上的拨杆,将灯箱与镜臂连接。
2、将汞灯灯箱的电源插头插入荧光电源箱后的插座,再将荧光电源箱的插头插入220V外接电源。
3、打开荧光显微镜电源开关,电压表显示出电源电压,如电源电压波动不大于额定电压值的5%,即可按下启动开关点燃汞灯,如因天气太冷或电压不稳定等原因,一次启动未点燃汞灯,可以多按几次。待超高压汞灯弧光达到稳定状态并达到Zda发光效率,即可开始工作。
4、灯泡的调中:
①任选一块标本放在荧光显微镜载物台上。
②转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移出光路,转动滤色片组转换手轮,将紫光(V)或蓝光(B)或绿光(G)激发滤色片组转入光路,并将25荧光物镜转入光路。
③调节粗微调手轮,将标本像调焦清晰。
④前后推动垂直照明器右边的聚光镜调焦推杆,使视场光栏成像清晰,转动视场光栏拨杆将视场光栏收小,调节视场光栏调中螺钉使视场光栏居中,然后再将视场光栏开至Zda。
⑤转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移入光路,前后调节灯箱上的聚光镜拨杆,使汞灯的弧光在视场内成像清晰。
⑥调整灯箱上的灯泡水平调节螺钉和垂直调节螺钉,使汞灯的弧光居中。
⑦调整反光镜水平调节螺钉和垂直调节螺钉,使光源的反射像与汞灯的弧光分开。
⑧转动聚光镜旋钮把聚光镜移出光路,此时视场照明均匀。